PikoOrange 蛋白定量試劑盒使用說明書

發(fā)布時間：2017/11/14

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PikoOrange蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	保存	價格(元)
PikoOrange 蛋白定量試劑盒	D1101L1128	100 assays	室溫	180

產(chǎn)品描述

PikoOrange Protein Quantitation Kit是一個高度敏感的基于熒光技術(shù)定量純化蛋白質(zhì)的試劑盒，其檢測蛋白濃度范圍為0.1-15 ug/ml。比起傳統(tǒng)定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析，PikoOrange蛋白定量試劑盒敏感性更佳，此外，與NanoOrange蛋白質(zhì)定量測定技術(shù)相比具有更加的線性和重現(xiàn)性。PikoOrange蛋白定量試劑盒可顯示不同蛋白質(zhì)之間的zui小變異性，且熒光信號穩(wěn)定長達16小時；其受測樣本不論為純化蛋白或抗體皆適用。

需特別注意的是，PikoOrange對鹽類、緩沖液、去垢劑或是其他化學物質(zhì)都有不同程度的耐受性（表2）。

圖1：PikoOrange比NanoOrange有更好的線性和重現(xiàn)性

產(chǎn)品組分

組分	D1201L2222	D1201L2221
A: PikoOrange buffer, 10X (contains 2mM sodium azide)	2.5 mL	25mL
B: PikoOrange dye, 500X in DMSO	50 uL	0.5 mL
C: Bovine serum albumin (BSA) standard, 2mg/mL (contains 2 mM sodium azide)	40 uL	0.4 mL

技術(shù)參數(shù)

Ex/Em 480/598 nm （結(jié)合BSA）。

運輸和保存方法

室溫保存，不要冷藏PikoOrange緩沖液。PikoOrange Dye需避光保存，產(chǎn)品可穩(wěn)定保存至少12個月。如果緩沖液出現(xiàn)沉淀，可加熱到37℃并漩渦溶解。如果長時間不用，組分C應(yīng)避光保存在4℃。

使用方法

1、準備1x PikoOrange緩沖液: 1:10 稀釋10x緩沖液在dH2O。例如，添加1 mL10x 緩沖液至9 mL dH2O. 1 x PikoOrange緩沖液可以儲存在室溫下。

2、使用前準備PikoOrange工作液：將500xPikoOrange染料按1:500用1x PikoOrange緩沖液稀釋。例如，添加10 uL 500xPikoOrange染料值5 mL 1x PikoOrange緩沖液。

注意：您將需要大約3 mL工作液制作標準曲線（見表1)以及每孔檢測樣品250 ul工作液。

3、準備未知樣本：10 uL 樣本添加 250 uLPikoOrange工作液。

注意：您可能需要稀釋未知樣本的得到不同濃度的樣本。樣品稀釋可能會減少干擾物質(zhì)的影響。

4、準備一個蛋白質(zhì)標準曲線所需的BSA濃度，如表1所示。

5、樣本和標準蛋白加熱至90- 95℃ 10分鐘，此過程需避光操作。

6、取出樣本室溫避光放置20分鐘冷卻。短時間離心以收集全部樣本。

7、每個標準樣品或未知樣品取200 uL轉(zhuǎn)移到96孔酶標板，熒光酶標儀讀數(shù)。激發(fā)/發(fā)射波長為480/598 nm。

注意：另外，樣品可以被轉(zhuǎn)移到熒光試管使用熒光儀測量。如果需要超過200 uL體積測量，等比例放大配置方案。

表1：準備BSA樣品制作標準曲線

	BAS體積	工作液體積	BSA 終濃度（ug/mL）
A	7.5 uL BSA std (2mg/mL)	1 mL	15
B	333 uL solution A	167 uL	10
C	250 uL solution B	250 uL	5
D	250 uL solution C	250 uL	2.5
E	200 uL solution D	300 uL	1
F	250 uL solution E	250 uL	0.5
G	250 uL solution F	250 uL	0.25
H	100 uL solution G	150 uL	0.1
I	0 mL	250 uL	0

表2：PikoOrange對不同化學物質(zhì)的耐受性

化合物	zui高承受濃度
SDS	0.01%
Triton X-100	Below 0.001%
Tween 20	Below 0.001%
CHAPS	Below 0.001%
Sodium deoxycholate (DOC)	Below 0.001%
Urea	10 mM
DTT	100 mM
beta-ME	0.1%
Ammonium sulfate	1 mM
Sodium azide	2 mM
Imidazole	50 mM
DNA	10ug/mL
EDTA	1mM
Sucrose	10 mM (0.34%)
Glycerol	1%
PBS	0.02X
NaCl	1 mM
CaCl2	0.01 mM
MgCl2	0.2 mM

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