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當前位置:首頁新聞資訊NAT BIOTECHNOL|EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染試劑(高效)(IF33.1)

NAT BIOTECHNOL|EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染試劑(高效)(IF33.1)

更新時間:2025-07-10點擊次數(shù):15
  在該研究中,研究者構(gòu)建了多個BER相關基因的敲除細胞株,結(jié)合體外脫氨實驗發(fā)現(xiàn)TALEDs并非直接在雙鏈DNA上進行A-to-G編輯,而是依賴DddA誘導C-to-U的脫氨反應,觸發(fā)線粒體堿基切除修復(BER)過程。在該過程中,TALED中的DddA首先介導了C-to-U的脫氨,體內(nèi)的尿嘧啶糖苷酶會進一步切除所產(chǎn)生的尿嘧啶(U),從而形成堿基缺乏(AP)位點,含有AP位點的DNA單鏈被APE1催化切割或自發(fā)斷裂,產(chǎn)生DNA單鏈斷裂(SSB)。SSB被核酸外切酶hMGME1進一步加工形成單鏈DNA(ssDNA),TALED中的TadA8e以ssDNA為底物介導A-to-I的脫氨反應,并在隨后的修復過程中完成A-to-G的編輯。
 
TALED工作機制示意圖
 
  進一步,研究者利用BER開發(fā)了一系列增強型TALEDs (eTALED6s),顯著提高了TALEDs在靶向位點處的編輯效率。并且通過對腺嘌呤脫氨酶TadA8e進行工程化改造,使得TALEDs在轉(zhuǎn)錄組水平上的脫靶突變顯著降低,同時還縮小了編輯窗口,減少了旁觀者效應,顯著提高了編輯產(chǎn)物純度。研究者還使用esTALED6和工程化的esTALED6R在線粒體基因組中模擬了與Leigh綜合征和MELAS相關的致病突變m.A13514G,通過測量氧耗率(OCR),證實eTALEDs成功誘導了預期的線粒體功能異常。
 
  這項研究不僅補充了TALED分子機制研究的空白,還在分子機制研究的基礎上進一步構(gòu)建了一系列精準、高效、低脫靶的新型線粒體腺嘌呤堿基編輯工具,使其在線粒體疾病模型構(gòu)建、遺傳修復和相關基礎研究中具有廣泛的應用前景。

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