產(chǎn)品描述

信使核糖核酸（mRNA）在細胞質(zhì)中啟動蛋白質(zhì)翻譯，不需要進入細胞核，可實現(xiàn)比DNA轉(zhuǎn)染更快的蛋白表達，且避免基因整合風險。

EZ Trans mRNA轉(zhuǎn)染試劑是一種結(jié)合了陽離子聚合物和脂質(zhì)體優(yōu)點的轉(zhuǎn)染試劑，協(xié)同促進轉(zhuǎn)染復合物進入細胞，隨后在胞質(zhì)中釋放，能夠在多種細胞類型中實現(xiàn)高效、低毒的轉(zhuǎn)染效果。

訂購信息

運輸與保存

藍冰運輸。4℃保存，有效期 6 個月；-30℃至-10℃保存，有效期12個月。注：避免反復凍融。

使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請參考表 1）

1． 接種細胞

對于貼壁細胞：轉(zhuǎn)染前一天，將細胞按照每孔1-2x10^5個細胞的量進行鋪板，使其在轉(zhuǎn)染時密度為60%-80% 為佳。

對于懸浮細胞：轉(zhuǎn)染當天，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物之前，用PBS清洗細胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基 (無血清) 重懸細胞，在24孔板中進行細胞鋪板，細胞密度為60-80%。

2． 準備轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復合物

(1)  對于每孔細胞，將 0.5 μg待轉(zhuǎn)染mRNA加入到1.5mL離心管中，加入2 μL轉(zhuǎn)染試劑與mRNA 混合，室溫孵育3 min。

(2)  往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清)，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min，形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物。

(3)  30 min后，往上述復合物中加入250 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清)，輕輕混勻。

3． 轉(zhuǎn)染細胞

(1)  細胞用PBS清洗1-2次，將上述350µL轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復合物加入每孔細胞。

(2)  在 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h，無需更換新的培養(yǎng)液，之后即可檢測轉(zhuǎn)染效果。若需更長時間轉(zhuǎn)染，可在轉(zhuǎn)染12 h后補充500 μL培養(yǎng)基 (含血清)，總體積達到 500μL，即達到常規(guī)的培養(yǎng)皿使用培養(yǎng)液的量，12-36 h后再進行檢測。

注意事項

1.    本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.    mRNA質(zhì)量：請務必使用高純度、無菌、無污染、無內(nèi)毒素的優(yōu)質(zhì)mRNA?？梢酝ㄟ^對mRNA進行加帽(相比于Cap0結(jié)構(gòu)，帶有Cap1 結(jié)構(gòu)的mRNA對于哺乳動物系統(tǒng)更適合)，使用N1-甲基-假尿苷修飾和添加poly(A)尾，以增強mRNA的穩(wěn)定性和壽命。

3.    整個實驗過程使用無RNA酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。

4.    細胞條件：細胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率，待轉(zhuǎn)染細胞應處于良好生長狀態(tài)，建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于90% 的細胞進行轉(zhuǎn)染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。

5.    細胞培養(yǎng)液要求：EZ Trans mRNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染實驗要求采用無血清轉(zhuǎn)染體系(推薦使用Opti-MEM減血清培養(yǎng)基)，因為血清會影響復合物的形成及mRNA轉(zhuǎn)染效率。

6.    由于某些特殊培養(yǎng)基中的成分可能會抑制陽離子聚合物介導的轉(zhuǎn)染，因此建議測試這些培養(yǎng)基與本產(chǎn)品的相容性，以確保最佳轉(zhuǎn)染效果。

7.    試劑用量的優(yōu)化：RNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，初次使用應優(yōu)化mRNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑用量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。通常情況下，24孔板的推薦mRNA用量為0.2-1 μg，轉(zhuǎn)染試劑推薦用量為2-4 μL。建議初次使用時，可在推薦范圍內(nèi)進行不同用量的預實驗，以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。

表 1：不同培養(yǎng)體積對應的待轉(zhuǎn)mRNA、 EZ Trans、稀釋液用量

注：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據(jù)細胞類型及其他實驗條件進行優(yōu)化。a: 稀釋轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復合物所需培養(yǎng)基的量；b: 加入轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復合物的培養(yǎng)基的量。

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本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。