EZTrans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑,其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的陽(yáng)離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,并通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)李記生物的優(yōu)化處理,具有轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性低,操作簡(jiǎn)單,重復(fù)性好,適用范圍廣等特點(diǎn)。...
腸激酶(Enterokinase,EK,EC3.4.21.9)是一種異源二聚體形式存在于哺乳動(dòng)物十二指腸內(nèi)的絲氨酸蛋白酶。它能高效專一性的水解工程菌表達(dá)的融合蛋白(識(shí)別位點(diǎn)是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)釋放出目的蛋白,被廣泛用于生物工程制藥的開(kāi)發(fā)。牛腸激酶由一條結(jié)構(gòu)亞基(重鏈)和一條催化亞基(輕鏈)構(gòu)成,二者以二硫鍵結(jié)合。據(jù)報(bào)道,重組腸激酶輕鏈體外具有全酶的酶切特異性,同時(shí)對(duì)基因工程融合蛋白底物的酶切活性較提純的牛腸激酶明顯增強(qiáng)。天然腸激酶來(lái)源有限,且從動(dòng)物組織提...
簡(jiǎn)析各類細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。定義隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。下文中將從多個(gè)維度,介紹細(xì)胞轉(zhuǎn)染的各類小知識(shí)。一、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達(dá)的蛋?正確折疊并進(jìn)行復(fù)雜修飾,表達(dá)的蛋?更接近真實(shí)自然狀態(tài),便于模擬真實(shí)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境,進(jìn)行蛋白功能研究。把目的基因轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞,表達(dá)?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式:瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系),如圖...
這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理:使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性,經(jīng)過(guò)起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì),進(jìn)行密度梯度超速離心,RNA沉淀于管底,而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法,不但能得到高質(zhì)量的RNA,而且能同時(shí)分離出細(xì)胞染色體DNA.本法對(duì)于冷凍時(shí)間長(zhǎng)、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不易分離的組織標(biāo)本以及富含RNA酶的組織細(xì)胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高,已成為提取哺乳動(dòng)物細(xì)...
科研人員還在為如何選擇核酸染料而煩惱嗎?帶您認(rèn)識(shí)幾款優(yōu)秀的核酸染料一、李記GelRed,李記GelGreen——李記生物研發(fā)的兩款核酸染料。據(jù)不*統(tǒng)計(jì),有強(qiáng)烈致癌、致畸作用的EB染料仍以90%的優(yōu)勢(shì)占據(jù)核酸染料使用量多,在眾多的EB替代染料中,名氣最大的要數(shù)Life公司的SYBR系列、美國(guó)Biotium公司的GelRed,GelReen染料,其他替代染料要么是EB,吖啶橙改名,要么是國(guó)內(nèi)不成熟的仿品,安全性毫無(wú)保障。Life公司的SYBRGreen,SYBRGoad,SYBR...
一、細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性細(xì)胞增殖是活細(xì)胞的重要?理功能之?,細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性檢測(cè)所用的方法相近,但實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?。?xì)胞增殖是通過(guò)細(xì)胞增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)判斷細(xì)胞的數(shù)量變化,例如細(xì)胞計(jì)數(shù)法,反應(yīng)的就是細(xì)胞真實(shí)的數(shù)量。而細(xì)胞活性檢測(cè),則是通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞受到藥物或其他措施處理后,標(biāo)志物產(chǎn)量或濃度的變化,進(jìn)而判斷藥物或處理措施的作用,細(xì)胞活性檢測(cè)所得結(jié)論,往往反映了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的。細(xì)胞增殖檢測(cè),因檢測(cè)標(biāo)志物的不同,目前大致分為四類:DNA合成檢測(cè)、代謝活性檢測(cè)、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測(cè)和ATP濃度...
生物大分子的貯藏保存可分為干態(tài)和液態(tài)貯藏兩種。蛋白質(zhì)失活受多種理化因素的影響,主要有空氣、溫度、水分、光線、酸堿度、樣品狀態(tài)、微生物活動(dòng)、保存時(shí)間和容器等。這些因素可單獨(dú)起作用,但更多情況是協(xié)同作用??偟膩?lái)說(shuō),蛋白質(zhì)的保存主要考慮其構(gòu)型穩(wěn)定、活性中心的保護(hù)、避免輔助因子喪失等,以防止其變性、解聚或降解。由于溫度和水分對(duì)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性影響很大,故蛋白質(zhì)最好是低溫、冷凍或冷凍干燥后低溫干燥保存。1.液態(tài)保存(1).在低溫下保存蛋白質(zhì)對(duì)熱敏感,溫度越高,穩(wěn)定性越差。因此,低溫保存蛋...
電話
微信咨詢
關(guān)注公眾號(hào)