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蛋白Marker即蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，是幾種已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物，像“尺子”一樣用來(lái)指示蛋白質(zhì)條帶的大小。在WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，蛋白Marker主要是用來(lái)指示蛋白條帶所對(duì)應(yīng)的分子量大小，此外，蛋白Marker還可以用來(lái)輔助判斷蛋白轉(zhuǎn)膜是否成功或蛋白在凝膠上的電泳進(jìn)度等作用，所以選擇合適的蛋白Marker也是實(shí)驗(yàn)成功的重要條件之一。李記生物預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)預(yù)染蛋白在不同的緩沖體系下有不同的表觀分子量，以上2個(gè)圖片為兩種緩沖體系下的電泳示意圖。適合作為SDS-PAG...

無(wú)血清細(xì)胞凍存液的操作方法主要包括細(xì)胞的收集、離心、凍存液的加入、分裝、凍存以及后續(xù)的解凍與復(fù)蘇等步驟。以下是詳細(xì)的操作方法：一、細(xì)胞的收集與離心細(xì)胞收集：使用常規(guī)方法收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞。對(duì)于貼壁細(xì)胞，可以使用胰酶或EDTA等試劑進(jìn)行消化，使其從培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板表面脫落，然后收集到試管或離心管中。細(xì)胞離心：將收集到的細(xì)胞懸浮液置于離心管中，進(jìn)行離心處理以收集細(xì)胞沉淀。離心條件通常為1,0002,000rpm，4℃，持續(xù)35分鐘。注意，離心時(shí)應(yīng)確保溫度適宜，以...

蛋白酶K，屬于一種廣譜蛋白酶，由白色念珠菌（Candidaantarctica）發(fā)酵產(chǎn)生。它能夠在較寬的pH值范圍內(nèi)（pH4-12）保持活性，且在高溫條件下（65℃）仍能穩(wěn)定工作，這種穩(wěn)定性使蛋白酶K能夠在多種實(shí)驗(yàn)條件下發(fā)揮其作用，成為科研人員手中的得力助手。在分子生物學(xué)領(lǐng)域，蛋白酶K的應(yīng)用尤為廣泛。在DNA提取過(guò)程中，蛋白酶K能夠高效地降解細(xì)胞和組織中的蛋白質(zhì)，包括那些與DNA緊密結(jié)合的組蛋白，從而釋放出純凈的DNA，為后續(xù)的PCR擴(kuò)增、測(cè)序等實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量的DNA模板。此...

提到蛋白提取，大家不約而同會(huì)想到RIPA裂解液，裂解液加入樣品中，離心即可完成蛋白的提取。然而RIPA裂解液我們真的用對(duì)了嗎？RIPA裂解液是從動(dòng)物細(xì)胞或組織中提取蛋白的常用裂解液，其工作原理是利用去污劑（表面活性劑）裂解細(xì)胞膜和核膜，從而獲取細(xì)胞和組織中的RIPA可溶性蛋白。RIPA裂解液的選擇RIPA裂解液中主要包含去污劑，緩沖體系，等滲體系，變性劑、穩(wěn)定劑等。其中去污劑是細(xì)胞裂解液中重要成分，是由疏水尾端基團(tuán)和極性親水頭端基團(tuán)組成的兩性分子，它們能夠降低水的表面張力，所...

蛋白質(zhì)濃度測(cè)定是用于計(jì)算純化方法的回收率的重要方法。常用的測(cè)定方法包括雙縮脲法、Lowry法、紫外吸收法、BCA蛋白濃度檢測(cè)法等。其中常用的方法就是BCA法。BCA全稱是BicinchoninicAcidAssay，也叫SmithAssay，這個(gè)方法是由PaulK.Smith發(fā)明的。這個(gè)方法通過(guò)展示不同濃度樣品的顏色變化來(lái)判斷蛋白的濃度。檢測(cè)原理BCA是一種堿性的水溶性復(fù)合物，性質(zhì)穩(wěn)定。在其提供的堿性環(huán)境下，蛋白質(zhì)可以將BCA試劑中的Cu2+還原為Cu+，Cu+繼而與BCA試...

在現(xiàn)代生物技術(shù)領(lǐng)域，DNA電泳技術(shù)已成為一種實(shí)驗(yàn)手段。它廣泛應(yīng)用于基因克隆、基因突變檢測(cè)、DNA序列分析等領(lǐng)域。而DNA電泳套裝則是進(jìn)行這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的工具。本文將為您詳細(xì)介紹DNA電泳套裝的組成、原理及其在生物科研中的應(yīng)用。一、DNA電泳套裝的組成DNA電泳套裝主要包括以下幾部分：電泳儀：用于提供穩(wěn)定的直流電源，使DNA分子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移。電泳槽：一般為矩形或梳子形狀，用于裝載電泳凝膠。電泳凝膠：由聚丙烯酰胺或瓊脂糖等物質(zhì)制成，是DNA分子遷移的載體。凝膠制備試劑：包括凝膠...